एलिसा किट प्रतिजन किंवा प्रतिपिंडाच्या घन टप्प्यावर आणि प्रतिजन किंवा प्रतिपिंडाच्या एंझाइम लेबलिंगवर आधारित आहे. घन वाहकाच्या पृष्ठभागावर बांधलेले प्रतिजन किंवा प्रतिपिंड अजूनही त्याची रोगप्रतिकारक क्रिया टिकवून ठेवतात आणि प्रतिजन किंवा प्रतिपिंड असे लेबल असलेले एन्झाईम त्याची इम्यूनोलॉजिकल क्रिया आणि एन्झाइम क्रियाकलाप दोन्ही राखून ठेवतात. निर्धाराच्या वेळी, चाचणी अंतर्गत नमुना (ज्यामध्ये प्रतिपिंड किंवा प्रतिजन मोजला जातो) घन वाहकाच्या पृष्ठभागावरील प्रतिजन किंवा प्रतिपिंडाशी प्रतिक्रिया देतो. घन वाहकावर तयार झालेले प्रतिजन-अँटीबॉडी कॉम्प्लेक्स वॉशिंगद्वारे द्रवमधील इतर पदार्थांपासून वेगळे केले जाते.
एंजाइम-लेबल केलेले प्रतिजन किंवा प्रतिपिंडे जोडले जातात, जे प्रतिक्रियेद्वारे घन वाहकाला देखील बांधतात. यावेळी, घन टप्प्यात एन्झाइमचे प्रमाण नमुन्यातील पदार्थाच्या प्रमाणात असते. एन्झाइमच्या प्रतिक्रियेचा थर जोडल्यानंतर, सब्सट्रेट एन्झाइमद्वारे उत्प्रेरित होऊन रंगीत उत्पादने बनते. उत्पादनाची रक्कम नमुन्यातील चाचणी केलेल्या पदार्थाच्या प्रमाणाशी थेट संबंधित आहे, म्हणून रंगाच्या खोलीनुसार गुणात्मक किंवा परिमाणात्मक विश्लेषण केले जाऊ शकते.
एन्झाईम्सची उच्च उत्प्रेरक कार्यक्षमता अप्रत्यक्षपणे रोगप्रतिकारक प्रतिसादाचे परिणाम वाढवते, परख अत्यंत संवेदनशील बनवते. एलिसा हे प्रतिजन निश्चित करण्यासाठी वापरले जाऊ शकते, परंतु प्रतिपिंड निश्चित करण्यासाठी देखील वापरले जाऊ शकते.
एलिसा किटची मूलभूत तत्त्वे
ते वस्तूला एन्झाइमशी जोडण्यासाठी प्रतिजन आणि प्रतिपिंडाची विशिष्ट प्रतिक्रिया वापरते आणि नंतर परिमाणवाचक निर्धारासाठी एन्झाइम आणि सब्सट्रेट यांच्यात रंग प्रतिक्रिया निर्माण करते. मापनाची वस्तू प्रतिपिंड किंवा प्रतिजन असू शकते.
निर्धार करण्याच्या या पद्धतीमध्ये तीन अभिकर्मक आवश्यक आहेत:
â सॉलिड फेज प्रतिजन किंवा प्रतिपिंड (रोगप्रतिकारक शोषक)
â¡ एंजाइम लेबल केलेले प्रतिजन किंवा प्रतिपिंड (मार्कर)
एन्झाइम क्रियेसाठी सब्सट्रेट (रंग विकास एजंट)
मापनामध्ये, प्रतिजन (अँटीबॉडी) प्रथम घन वाहकाला बांधलेले असते, परंतु तरीही त्याची रोगप्रतिकारक क्रिया कायम ठेवते, आणि नंतर प्रतिपिंड (प्रतिजन) आणि एन्झाईमचा संयुग्मित (मार्कर) जोडला जातो, जो अजूनही त्याची मूळ रोगप्रतिकारक क्रिया आणि एन्झाइम टिकवून ठेवतो. क्रियाकलाप जेव्हा संयुग्मन घन वाहकावर प्रतिजन (अँटीबॉडी) सह प्रतिक्रिया देते, तेव्हा एंझाइमचा संबंधित सब्सट्रेट जोडला जातो. म्हणजेच, उत्प्रेरक हायड्रोलिसिस किंवा रेडॉक्स प्रतिक्रिया आणि रंग.
त्यातून निर्माण होणारी रंगाची छटा मोजावी लागणार्या प्रतिजन (अँटीबॉडी) च्या प्रमाणात असते. हे रंगीत उत्पादन उघड्या डोळ्यांनी, ऑप्टिकल मायक्रोस्कोप, इलेक्ट्रॉन मायक्रोस्कोपद्वारे पाहिले जाऊ शकते, स्पेक्ट्रोफोटोमीटर (एंझाइम लेबल इन्स्ट्रुमेंट) द्वारे देखील मोजले जाऊ शकते. पद्धत सोपी, सोयीस्कर, जलद आणि विशिष्ट आहे.